形态病理平台

原位杂交

仪器型号

Hitachi Regulus8100,Sigma 300;Zeiss Gemini 300; Hitachi S4800;JSM-7800F;蔡司 Supra 55等

预约次数:49208
服务周期:平均5.0个工作日
测试收费:沟通
详细介绍
 
项目介绍
 
荧光原位杂交技术是一种重要的非放射性原位杂交技术,原理是利用报告分子(如生物素、地高辛等)标记核酸探针,然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交,若两者同源互补,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。此时可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待DNA进行定性、定量或相对定位分析。
 
样本要求
 
1. 送样要求
1. 包埋:石蜡包埋、OTC包埋。
(1) 标本要求:已固定在4%多聚甲醛中的动物组织,或已固定在FAA中的植物组织。
(2) 送样要求:
a. 动物组织:处死动物后立即取材,生理盐水冲洗表面,4%的多聚甲醛固定,一般组织固定48h左右进行包埋最好,大小不超过1cm*1cm*0.5cm,装组织的管子一定要比组织大,固定液是样品体积的5倍以上,以保证充分固定,封口膜封好避免运输过程中固定液洒出。
b. 植物组织:新鲜取材后固定于FAA固定液中,大小不超过1cm*1cm*0.5cm,如果组织悬浮于固定液上,可以抽真空使其下沉。
注:常温或少量冰袋运输。
2. 切片:石蜡切片、冰冻切片。
(1) 标本要求:已包埋的动物/植物组织    。
(2)送样要求:
a. 石蜡包埋的组织:冰袋运输。
b. OTC包埋的组织:干冰运输。
3. 染色:脱蜡至水、苏木素染色、伊红染色、脱水封片。
(1) 标本要求:切片。
(2) 送样要求:
a. 石蜡切片:石蜡切片码齐装在塑料切片盒中,冰袋运输。
b. 冰冻切片:冰冻切片码齐装在塑料切片盒中,干冰运输。 
4. 拍照:光学拍照(白光)、数字扫描(白光)
(1) 标本要求:已染色的切片。
(2) 送样要求:已染色的切片,常温或少量冰袋运输。
 
结果展示
 
油菜花蕾:

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常见问题
 
question
1、原位杂交杂交液作用
(1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血清白蛋白及载体DNA或RNA等。 (2)杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。 (3)甲酰胺可使杂交温度降低,所以杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。 (4)硫酸葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的。
question
2、原位杂交探针浓度
(1)探针浓度依其种类和实验要求略有不同,一般为0.5—5.0 ug/ml(0.5—5.0 ng/ ul)。
(2)最适宜的探针浓度要通过实验才能确定。
(3)探针的长度一般应在50-300个碱基之间,最长不宜超过400个碱基。
(4)探针短易进入细胞,杂交率高,杂交时间短。
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